旋毛虫ESF1蛋白抗体的制备及其对人结肠癌HCT-8细胞的影响作用

【摘要】结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，占胃肠道肿瘤的第二位。结肠癌的传统治疗以手术方式为主，辅以放、化疗，但手术治疗创伤性大，放、化疗又会产生不同程度的副作用，治疗效果不尽人意。为了延长患者的生存期及提高其生存质量，生物治疗已逐渐成为人们的研究热点。早在70年代末，人们就发现旋毛虫具有抗肿瘤作用，但多采用口服感染旋毛虫使其进入体内达到抗肿瘤作用，由于活虫对机体具有潜在的危害性，故将旋毛虫中抗肿瘤的活性成分提取出来尤为重要。本实验室已筛选出一些与肿瘤相关的旋毛虫基因，如Tsp05904、Tsp10855、Tsp06172、Tsp08404、Tsp05091、Tsp05931及Tsp09347等，其中Tsp09347基因编码的蛋白为ESF1，其与人结肠癌HCT-8细胞具有免疫交叉反应。本实验通过制备ESF1蛋白抗体，进而观察其对人结肠癌HCT-8细胞的影响作用，为旋毛虫抗肿瘤的研究提供了新的思路。目的：制备出旋毛虫ESF1蛋白抗体，并通过体内、外实验观察其对人结肠癌HCT-8细胞的影响作用。方法：应用RT-PCR扩增出旋毛虫基因Tsp09347，构建克隆质粒18T-Tsp09347，随后构建表达质粒pET-28a（+）-Tsp09347，并转入大肠杆菌进行原核表达，得到旋毛虫ESF1蛋白；采用WesternBlot方法对ESF1蛋白进行鉴定，并利用包涵体蛋白纯化方法对其纯化；利用纯化后的ESF1蛋白免疫BABL/c雌鼠制备其多克隆抗体，并用ELISA方法测其效价；利用MTT法观察所制备的多克隆抗体对人结肠癌HCT-8细胞增殖活性的影响；通过细胞培养构建BABL/c裸鼠皮下移植瘤模型，观察ESF1蛋白多克隆抗体对人结肠癌HCT-8细胞移植瘤生长的影响。结果：RT-PCR、测序及WesternBlot结果显示，表达和纯化的蛋白与旋毛虫ESF1蛋白相一致；ELISA结果显示，ESF1蛋白多克隆抗体效价达1:204800；MTT结果显示，ESF1蛋白多克隆抗体作用于HCT-8细胞24h、48h、72h后，细胞增殖活性均明显低于对照组（P＜0.05）；体内实验结果显示：ESF1蛋白多克隆抗体治疗组肿瘤体积明显小于未治疗组（P＜0.05），且小于阳性对照组。结论：本实验所制备的旋毛虫ESF1蛋白多克隆抗体对人结肠癌HCT-8细胞在体内、外均有明显的抑制作用。
【作者】孔纪霞；
【导师】倪劲松；
【作者基本信息】吉林大学，病理学与病理生理学，2014，硕士
【关键词】旋毛虫；Tsp09347基因；ESF1蛋白；结肠癌；HCT-8细胞；

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